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產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌(（Shiga toxin-producing Escherichia coli， STEC）是一類能產(chǎn)生志賀氏毒素的大腸桿菌，為革蘭氏陰性桿菌，基因組全長為5 Mbp 左右，不同菌株之間可能存在一定差異。產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌主要通過污染的食物、水或直接接觸感染者等途徑傳播。產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌可引起人類嚴重的疾病，如出血性結(jié)腸炎、溶血性尿毒綜合征等，對人類健康有較大危害，因此快速檢測產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌具有重要的意義。為此，本公司以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)了產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌的檢測試劑盒，它具有下列特點：
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍蓋管 |
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產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌qPCR陽性對照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
1份 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165uL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6、5、4、3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標(biāo)準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標(biāo)準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標(biāo)準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標(biāo)準曲線樣品。放冰上待用。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果樣本制備陽性對照或PCR陽性對照(包括標(biāo)曲樣本)結(jié)果為陰性，則整個實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重新樣本制備，重新進行PCR擴增或跟廠家聯(lián)系。如果樣本制備陰性對照或PCR陰性對照結(jié)果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系。
自備試劑
運輸及保存
