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021-54845833/15800441009
基本信息
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細(xì)胞名稱 |
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細(xì)胞品牌 |
通蔚生物 |
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細(xì)胞規(guī)格 |
1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細(xì)胞英文 |
A549-eGFP-Puro細(xì)胞 |
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細(xì)胞來源 |
Imanis |
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細(xì)胞簡介 |
A549-eGFP-Puro是人肺癌細(xì)胞株A549（ATCC®CCL-185?）的多克隆群體。為了在多克隆群體中獲得穩(wěn)定的報告表達(dá)，用LV-eGFP-PGK-Puro（LV031）轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，并用嘌呤霉素進(jìn)行篩選。LV-eGFP-PGK-Puro在脾臟成瘤病毒（SFFV）啟動子下編碼增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（eGFP）cDNA，在磷酸甘油酸激酶（PGK）啟動子下編碼嘌呤霉素抗性基因（Puro） |
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種屬來源 |
人 |
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組織來源 |
肺 |
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患者性別 |
男 |
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患者年齡 |
58 |
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疾病特征 |
正常 |
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細(xì)胞形態(tài) |
上皮細(xì)胞樣 |
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生長特性 |
貼壁生長 |
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培 養(yǎng) 基 |
DMEM培養(yǎng)基，90%；FBS，10%；1X青霉素/鏈霉素；1 μg/mL 嘌呤霉素 |
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生長條件 |
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37℃ |
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傳代方法 |
1：8，每周2次 |
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凍存條件 |
90%完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存 |
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支原體檢測 |
陰性 |
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發(fā)貨方式 |
快遞運(yùn)輸(特殊情況的另處理) |
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供應(yīng)范圍 |
僅限于科研實(shí)驗(yàn)使用，不得用于其它用途 |
接受后處理
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處理1 |
收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們 |
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處理2 |
請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h |
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處理3 |
棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基 |
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處理4 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司的完全培養(yǎng)基 |
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處理5 |
接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系 |
細(xì)胞操作
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復(fù)蘇細(xì)胞 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
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細(xì)胞傳代 |
如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng): |
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1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 |
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2. 加 1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 |
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3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。 |
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4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
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細(xì)胞凍存 |
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類: |
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1. 棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入1ml 胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 |
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2. 4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。 |
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3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
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注意事項(xiàng) |
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 |
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2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 |
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3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均會貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力，請拍下照片及時和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。 |
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4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì)胞匯合度80%左右時正常傳代。 |
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5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。 |
售后服務(wù)
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細(xì)胞予重發(fā) |
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1. 細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。 |
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2. 收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。 |
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3. 收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。 |
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4. 常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。 |
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5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。 |
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6. 細(xì)胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。 |
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細(xì)胞不予重發(fā) |
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1. 客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。 |
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2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。 |
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5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。 |
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6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。 |
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特別說明 |
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上海通蔚生物客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以撥打免費(fèi)服務(wù)電話021-54845833或15800441009，我們隨時給予實(shí)驗(yàn)中的免費(fèi)解答。 |
