蜂房蜜蜂球菌(歐洲蜂幼蟲(chóng)腐臭病)PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

蜂房蜜蜂球菌（Melissococcus pluton）是引起歐洲幼蟲(chóng)腐臭病（Europeanfoulbrood，簡(jiǎn)稱 EFB）的病原菌，該菌單個(gè)的形態(tài)為披針形，常結(jié)成鏈狀或成簇排列，直徑 0.5μm~1.0μm，是一種革蘭氏陽(yáng)性菌，但有染色特性不穩(wěn)定性，有時(shí)候可能為革蘭氏陰性菌，兼性厭氧。由于歐洲幼蟲(chóng)腐臭病是急性、毀滅性傳染病，能導(dǎo)致蜜蜂幼蟲(chóng)的大批死亡，最終導(dǎo)致整個(gè)蜂群的滅亡，危害巨大，其中中蜂發(fā)病比意蜂更嚴(yán)重，我國(guó)也是主要的疫區(qū)之一。該病具有傳播迅速、發(fā)病快的特點(diǎn)，是蜜蜂的主要病害。農(nóng)業(yè)部和質(zhì)檢總局聯(lián)合制定的最新的《中華人民共和國(guó)進(jìn)境動(dòng)物檢疫疫病名錄》將其列為二類(lèi)傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）也將其列為檢疫對(duì)象，因此蜂房蜜蜂球菌快速檢測(cè)具有重要的意義。本試劑盒就是為此目得根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)，

1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專(zhuān)一性強(qiáng)，只擴(kuò)增蜂房蜜蜂球菌（歐洲蜂幼蟲(chóng)腐臭?。?，與其他病原沒(méi)有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分：

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	蜂房蜜蜂球菌（歐洲蜂幼蟲(chóng)腐臭?。?/span> PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	蜂房蜜蜂球菌（歐洲蜂幼蟲(chóng)腐臭?。?/span> PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 /μL）	50 μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品 DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容?？梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 蜂房蜜蜂球菌（歐洲蜂幼蟲(chóng)腐臭病） PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：

3. 對(duì)N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2 個(gè)樣品管	PCR 陰性對(duì)照	PCR陽(yáng)性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
蜂房蜜蜂球菌歐洲蜂幼蟲(chóng)腐臭病 PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個(gè)樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR陰性對(duì)照(水)	--	18μL	--
PCR陽(yáng)性對(duì)照蜂房蜜蜂球菌歐洲蜂幼蟲(chóng)腐臭病PCR陽(yáng)性對(duì)照1000倍稀釋液	--	--	18μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過(guò)程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測(cè)：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

021-54845833/15800441009

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細(xì)胞系

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